Validace (q)PCR a Real-Time PCR teplotních cyklerů:
Jak validujeme?
Běžná teplotní čidla, jako termočlánky, nesplňují moderní požadavky na přesnost a opakovatelnost měření teploty v PCR přístrojích. Díky použití termistorů, CYCLERtest vyvinul dynamický vícekanálový měřící systém, jenž velmi dobře vyhovuje specifickým požadavkům pro ověřování PCR přístrojů. Seznam cyklerů, které validujeme pomocí systému MTAS.
MTAS: Mobilní Teplotní Akviziční Systém:
Systém MTAS sestává z 15 až 48 senzorů, jenž jsou umístěny v pozicích vzorků a monitorují chování termálního cykleru, snímání signálů ze všech senzorů probíhá paralelně s frekvencí 2 Hz. Signál je statisticky a matematicky zpracován pomocí hardwaru a softwaru systému, za účelem získání co nejdůvěryhodnějších a nejpřesnějších výsledků. Použitá sada senzorů je velmi pečlivě vybrána, aby splňovala požadavky NIST (National Institute of Standards in Technology, Washington, USA). Funkce systému byla ověřena akreditovanou laboratoří podle standardů ISO 17025, celková přesnost měření je lepší než 0.1°C. Jednou z předností systému je bezpochyby to, že měření mohou být prováděna v místě instalace měřeného přístroje. Výsledky jsou uvedeny v podrobných protokolech, včetně srovnání s výrobcem deklarovanými parametry. Protokol obsahuje „Certifikát teplotní validity“.
Příklad certifikátu teplotní validity.
Co měříme?
Dva nejdůležitější měřené parametry jsou přesnost a uniformita teplotního PCR cykleru. Přesnost představuje odchylku teploty bloku od nastavené teploty, zatímco uniformita je měřením rozptylu teplot v jednotlivých jamkách bloku. Oba parametry závisí na úrovni teploty, při které jsou zjišťovány; přesnost cykleru běžně klesá při vyšších teplotách. Ohledně uniformity je situace o mnoho složitější. Hlavní výhodou dynamického vícekanálového měření je, že je možno zjistit, které jamky mají příliš vysokou odchylku teploty. Rychlost zahřívání (ramp) PCR cykleru je indikací strmosti teplotního gradientu při změnách teploty. Rozdíly v rychlosti zahřívání mohou mít vliv na průběh reakce. Některé cyklery jsou rychlejší, ovšem méně kontrolovatelné. Materiál, ze kterého je blok vyroben hraje důležitou roli. Přímo provázanými parametry s rychlostí zahřívání jsou teplotní překmity (overshoot) a podkmity (undershoot). Značí, o kolik °C cílová teplota překročila nastavenou teplotu zatímco probíhala stabilizace. Jediným způsobem, jak tyto parametry vizualizovat, je rychlé dynamické měření.
